血吸虫属LAMP检测试剂盒

产品货号：

BTN16-32000

中文名称：

血吸虫属LAMP检测试剂盒

英文名称：

Schistosoma spp. LAMP Kit

产品规格：

50次

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

血吸虫(Schistosoma spp.)是人畜互通寄生虫。其储存宿主种类较多，主要有牛、猪、犬、羊、马、猫及鼠类等30多种动物。病人及患病耕牛为主要传染源，其次，为受感染的羊、猪、犬、马、鼠类等。血吸虫尾蚴穿透皮肤可引起皮炎。大量童虫在人体内移动时，可引起咳嗽、咳血、发热等症状。成虫寄生于寄主的肛门静脉和肠系膜经脉中，虫卵沉积于肝脏和肠壁等组织，形成虫卵肉芽肿，最后导致肝硬化，引起贫血、消瘦、浮肿和腹水。儿童和幼畜因不能正常发育可成为侏儒，成人丧失劳动力，妇女不孕不育，甚至致死，因此快速检测血吸虫具有重要的意义。本公司在自己开发的技术基础上开发了简单快捷的血吸虫通用的荧光及可视化LAMP试剂盒，

产品特点

一般60分钟内出结果(取决于靶分子浓度)，比PCR快约1小时。
对20μL的反应体系，最大样品加样量达到14μL。
含可见光和荧光染料，既可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果，也可用荧光PCR仪进行实时荧光检测。
内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
特异性比PCR高，因为LAMP扩增使用4～6条引物而不是两条。
假阴性率低。
提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
只可用于科研，只可进行定性检测，不能用于定量检测。

组分	规格
4×荧光及可视化LAMP MagicMix	250μL
20×血吸虫通用LAMP引物混合液	50μL
血吸虫通用LAMP阳性对照(1×10³拷贝/μL)	150μL
超纯水	1mL

保存：-20℃，有效期一年。

使用方法

一、样品DNA的制备

用自选方法纯化样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。
如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照(PC)和一个样品制备阴性对照(NC)。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为XmL，则在XmL水中加10μL试剂盒提供的阳性对照(1万拷贝)，样品制备阴性对照是直接用X mL水作为阴性对照，然后和N个样品一起进行DNA提取操作，得到N+2个DNA样品。

二、荧光及可视化LAMP扩增及检测(20μL体系)

反应设置：如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加LAMP阴性对照和LAMP阳性对照各1个。在N+4个0.2mL PCR管中加入下列成分：

成分	N+2个样品管	LAMP阴性对照	LAMP阳性对照
4×荧光及可视化LAMP MagicMix	各5μL	5μL	5μL
20×血吸虫通用LAMP引物混合液	各1μL	1μL	1μL
N+2个样品DNA	各14μL	-	-
超纯水	-	14μL	4μL
试剂盒提供的阳性对照(1×10³拷贝/μL)	-	-	10μL

置混匀后进行扩增。由于本产品含双染料，可以根据实验室条件选择下列两种方式进行扩增和检测。
如果使用金属浴或水浴，则必须先在每个反应管中加30μL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。63℃保温120分钟。
如果使用荧光定量PCR仪：设聚合温度63℃，1次循环1分钟，120个循环，每分钟在FAM通道采集一次荧光信号。

三、结果分析及解读

如果是用水浴或金属浴进行的扩增，反应结束后只能肉眼判断结果。将反应管放置在白色背景(如白纸)前观察。扩增阳性对照管内反应液将呈现蓝色，无模板和无引物的阴性对照将呈浅蓝色。如果扩增阳性对照管内反应液不呈现蓝色，或无模板和无引物的阴性对照任何一个呈现蓝色，则说明试剂有问题，实验无效。请跟厂家联系。
如果实验有效，则样品管的颜色接近扩增阳性对照管则说明有扩增，如果接近无模板和无引物的阴性对照，则说明无扩增。反应结果示例如下(9为阴性，10为阳性)：
反应结束后，如是用荧光PCR仪扩增，则可分析扩增曲线和Ct。试剂盒提供的阳性对照的Ct将小于60，如果大于60，说明试剂可能失效，需跟厂家联系。无模板阴性对照和无引物阴性对照的Ct将大于120。如果任何小于60，则说明试剂或环境被污染，需重复实验或跟厂家联系。如果对照结果正常，说明实验有效，再分析样品。样品的Ct在60以下的为阳性，90以上的为阴性，60～90之间的为疑难样品，需要重复一次，如果还在60-90，需要电泳检测。
当实时荧光检测和可视化检测同时使用时，如果不一致，以实时荧光LAMP的数据为准。一般可视化结果滞后实时荧光检测结果20～30分钟，也就是说，在qPCR仪上第30分钟时呈现阳性的样品，其颜色变化在第50～60分钟时才能观察到。

产品目录